ВЛИЯНИЕ РАСТВОРИМЫХ ФАКТОРОВ, СЕКРЕТИРУЕМЫХ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ ЭНДОМЕТРИОЗА, НА ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ ФЕНОТИП МОНОЦИТОВ

С. А. Шифон ², Т. В. Тыринова ¹, Т. В. Веретельникова ³,
В. Г. Сисакян ^3,4, С. С. Кралинова ³, Н. М. Пасман ^2,3, Е. Р. Черных ¹

¹ Научно-исследовательский институт
фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск
² Новосибирский государственный университет
³ ООО «Клиника профессора Пасман», Новосибирск
⁴ Новосибирский областной клинический онкологический диспансер

Аннотация. Для понимания иммунопатогенеза эндометриоза исследовано влияние перитонеальной жидкости пациенток на фенотип моноцитов. Все формы заболевания характеризовались повышением CCR2 на промежуточных моноцитах. При перитонеальном/глубоком инфильтративном эндометриозе отмечено повышение CCR2 и экспрессии MerTK на промежуточных и неклассических моноцитах, при эндометриоидных кистах — повышение PDL1 на промежуточных моноцитах. Выявленные особенности открывают перспективы для разработки новых терапевтических подходов.

Abstract. The effect of patients’ peritoneal fluid on monocyte phenotype was investigated to understand endometriosis immunopathogenesis. All disease forms exhibited increased CCR2 expression on intermediate monocytes. Peritoneal/deep infiltrating endometriosis demonstrated elevated CCR2 and MerTK expression on intermediate and non-classical monocytes, while ovarian endometriomas showed enhanced PDL1 expression on intermediate monocytes. These distinct patterns provide insights for developing novel therapeutic approaches.

Актуальность. Эндометриоз поражает до 10 % женщин репродуктивного возраста и 50 % женщин с бесплодием. Несмотря на прогресс в понимании патогенеза, эффективность лечения остается недостаточной из-за гетерогенности заболевания [1]. Изучение особенностей функционального фенотипа различных субпопуляций моноцитов (классических, промежуточных и неклассических) при разных формах эндометриоза может способствовать разработке новых терапевтических подходов, учитывающих специфику иммунопатогенеза каждой формы заболевания.

Целью исследования было изучение влияния растворимых факторов, секретируемых при различных формах эндометриоза (эндометриоидные кисты яичников и перитонеальный и/или глубокий инфильтративный эндометриоз), на функциональный фенотип моноцитов для определения доминирующих путей иммунного ответа и последующей разработки персонализированных терапевтических подходов.

Материалы и методы. Исследование проводилось на базе ФГБНУ НИИФКИ. В исследование были включены 17 пациенток с различными формами эндометриоза, проходивших лечение в ООО «Клиника профессора Пасман» с февраля по ноябрь 2024 г. Средний возраст пациенток составил 36,1 ± 6,8 года (диапазон 26–48 лет).

Диагноз эндометриоза был подтвержден лапароскопически во всех случаях. Лапароскопические вмешательства были выполнены по поводу эндометриоза с терапевтической целью. Забор перитонеальной жидкости осуществлялся на начальном этапе лапароскопии в первую фазу менструального цикла. У всех пациенток были собраны данные анамнеза, включая информацию о хронических заболеваниях, предыдущих оперативных вмешательствах, наличии бесплодия и хронической тазовой боли.

В зависимости от локализации эндометриоидных очагов были выделены две группы пациенток: 1) группа с эндометриоидными кистами (n = 8); 2) группа с перитонеальным эндометриозом в сочетании с глубоким инфильтративным эндометриозом (n = 9). Основные характеристики приведены в таблице.

Две пациентки (11,8 %) получали терапию Визанной до операции. Воспалительные заболевания органов малого таза в анамнезе имели 10 пациенток (58,8 %), при этом у 6 из них (60 %) отмечалась персистенция возбудителей группы герпес-вирусов. Оперативные вмешательства на органах малого таза ранее перенесли 4 женщины (23,5 %), преимущественно это были гистероскопии и лапароскопические операции по поводу кист яичников.

Для изучения влияния растворимых факторов, ассоциированных с эндометриозом, объектом исследования служили моноциты периферической крови, полученные от условно здоровых женщин-доноров в возрасте до 55 лет без эндометриоза. Венепункция была осуществлена здоровым донорам на базе НИИФКИ, предоставившим на забор материала информированное добровольное согласие.

Клиническая характеристика пациенток с эндометриозом (n = 17)

Примечание. Данные представлены как M ± SD, если не указано иное.

* Определен до операции.

Мононуклеарные клетки (МНК) периферической крови здоровых доноров инкубировали в присутствии перитонеальной жидкости пациентов с эндометриозом (v/v 10 %) в течение 24 ч при 37 °С при 5 % СО₂. Контролем служили интактные МНК, культивируемые в отсутствие перитонеальной жидкости. По окончании культивирования методом проточной цитометрии оценивали содержание субпопуляций моноцитов среди МНК, а также экспрессию поверхностных маркеров MerTK, CCR2, PD-1 и PD-L1 с использованием советующих флуорохром-конъюгированных моноклональных антител. Субпопуляции моноцитов определяли как CD14⁺CD16⁻ (классические), CD14⁺CD16⁺ (промежуточные) и CD14⁺CD16⁺⁺ (неклассические) клетки.

Статистическая обработка результатов осуществлялась с помощью программы Statistica 12.0. При сравнении маркеров в двух независимых выборках использовали критерий Вилкоксона (W). Для проверки гипотез о наличии связи между изменением экспрессии маркеров на популяции МНК и влиянием перитонеальной жидкости был использован метод однофакторного дисперсионного анализа ANOVA. Критический уровень достоверности, принятый при проверке статистических гипотез, — p < 0,05.

Результаты. Анализ влияния перитонеальной жидкости (ПЖ) пациенток с эндометриозом на моноциты периферической крови здоровых доноров выявил характерный паттерн изменений независимо от формы заболевания. Наиболее выраженные изменения наблюдались в популяции промежуточных моноцитов, где было отмечено статистически значимое повышение уровня экспрессии хемокинового рецептора CCR2 (vs контроля MFI 2971,0 vs 2330,0; p_W = 0,019) и PDL1 в присутствии ПЖ (vs контроля MFI 1745,0 vs 1282,0; p_W = 0,027). Также наблюдалась тенденция к увеличению доли CCR2-позитивных клеток в этой популяции (89,6 vs 84,8 %; ANOVA p = 0,059). В субпопуляции неклассических моноцитов были выявлены тенденции к повышению как доли клеток, экспрессирующих иммуносупрессорную молекулу MerTK (56,5 vs 45,6 %; p_W = 0,095), так и интенсивности свечения самого маркера MerTK (vs контроля MFI 2518,5 vs 1930,0; p_W = 0,052) и ингибиторного лиганда PDL1 (vs контроля MFI 1575,5 vs 1339,5; p_W = 0,066) в сравнении с интактными МНК.

Анализ влияния ПЖ на фенотип моноцитов здоровых доноров с учетом формы эндометриоза выявил следующие закономерности. Растворимые факторы, присутствующие в ПЖ при перитонеальном и/или глубоком инфильтративном эндометриозе, значимо повышали относительное количество CCR2-позитивных клеток в популяции промежуточных моноцитов (91,8 vs 82,2 %; p_W = 0,014) и классических моноцитов доноров (90,5 vs 80,7 %; p_W = 0,048) в сравнении с интактными МНК. Кроме того, при культивировании МНК с ПЖ пациенток с такой формой эндометриоза отмечалось более выраженное повышение доли MerTK-позитивных клеток среди промежуточных моноцитов (92,0 vs 78,5 %;), сопровождавшееся повышением интенсивности свечения MerTK на неклассических моноцитах (vs контроля MFI 2891,0 vs 2049,0) в сравнении с интактными МНК.

В случае МНК, инкубируемых с ПЖ пациенток с яичниковым эндометриозом, отмечался иной характер изменений: на промежуточных моноцитах наблюдалась тенденция к повышению уровня экспрессии хемокинового рецептора CCR2 (vs контроля MFI 3196,5 vs 2330,0; p_W = 0,054) и статистически значимое увеличение уровня экспрессии PDL1 (vs контроля MFI 1809,0 vs 1180,0; p_W = 0,020). В субпопуляции неклассических моноцитов в присутствии ПЖ отмечалась тенденция к повышению уровня экспрессии PDL1 (vs контроля MFI 1662,0 vs 1213,5; p_W = 0,068).

Выводы. Различные фенотипы эндометриоза характеризуются специфическими паттернами активации моноцитов, подтверждая гетерогенность механизмов иммунопатогенеза этих форм заболевания. Общим для всех форм эндометриоза является повышение экспрессии хемокинового рецептора CCR2 на промежуточных моноцитах, свидетельствующее об усилении их миграционной способности в очаги воспаления, что согласуется с современными представлениями о роли хемокинового сигналинга в патогенезе эндометриоза [2]. При этом при инкубации с ПЖ от перитонеальных форм и/или глубоких инфильтративных наблюдается более выраженное повышение доли CCR2-позитивных клеток в сочетании с повышением экспрессии MerTK среди промежуточных и неклассических моноцитов, отражающее активацию механизмов регуляции воспалительного ответа и указывающее на более агрессивное течение заболевания [3]. В свою очередь, добавление ПЖ пациенток с эндометриоидными кистами характеризовалось значимым повышением экспрессии ингибиторного лиганда PDL1 на промежуточных моноцитах, что может свидетельствовать о преобладании иммуносупрессивных механизмов при данной форме заболевания [4]. Выявленные различия в иммунофенотипе моноцитов при разных формах эндометриоза обосновывают необходимость дифференцированного подхода к иммунотерапии заболевания с учетом его фенотипа и преобладающих механизмов иммунной регуляции.

Список литературы

1. Chapron C., Marcellin L., Borghese B., Santulli P. Rethinking mechanisms, diagnosis and management of endometriosis // Nature Reviews Endocrinology. 2019. Vol. 15 (11). P. 666–682.

2. Kapellos T. S., Bonaguro L., Gemünd I. et al. Human Monocyte Subsets and Phenotypes in Major Chronic Inflammatory Diseases // Frontiers in Immunology. 2019. Vol. 10. P. 2035.

3. Symons L. K., Miller J. E., Kay V.R. et al. The Immunopathophysiology of Endometriosis // Trends Mol Med. 2018. Vol. 24 (9). P. 748–762. DOI: 10.1016/j.molmed.2018.07.004.

4. Keir M. E., Butte M. J., Freeman G. J., Sharpe A. H. PD-1 and its ligands in tolerance and immunity // Ann. Rev. Immunol. 2008. Vol. 26. P. 677–704. DOI: 10.1146/annurev.immunol.26.021607.090331.